Чому не можна використовувати метиленовий синій замість нігрозину
? Оскільки метиленовий синій є основним фарбником і буде прилипати до слабо негативних бактерій. Нігрозин – кислотна пляма з негативним зарядом. Його відштовхують бактерії, тому він забарвлює фон.
Бактерії несуть чистий негативний заряд при pH 7. Тому катіонні барвники, такі як метиленовий синій, основний фуксин або кристалічний фіолетовий, корисні для прямого фарбування клітин, тоді як аніонні барвники, такі як еозин і нігрозин, не забарвлюють безпосередньо бактеріальні клітини.
Метиленовий синій не можна використовувати в негативному фарбуванні, оскільки це позитивне фарбування і не дасть бажаного ефекту фарбування фону.
Хоча можна використовувати будь-яку негативно заряджену пляму, рекомендується нігрозин, оскільки він дає рівномірніший фон, ніж туш. Однак інші кислотні барвники, такі як метиловий синій і конго червоний, також використовувалися в процедурах негативного фарбування.
Будь-які основні барвники, такі як метиленовий синій, добре підійдуть кристалічний фіолетовий, малахітовий зелений або сафранін. Основні (катіонні або позитивно заряджені) барвники зв’язуються з негативно зарядженими компонентами клітинної мембрани та цитоплазми.
Фарбування метиленовим синім є корисний для визначення смертності клітин. Якщо фарбувати зразок метиленовим синім, здорова клітина знебарвлює пляму. Це пов’язано з ферментами клітини, які відновлюють метиленовий синій, внаслідок чого він втрачає колір.