Формула розрахунку ефективності праймерів така (10^(-1/Значення нахилу)-1)*100 Але коли ми не використовуємо 1:10, 1:100…

Якщо нахил. Якщо 3,3, то аналіз посилюється на 100% або дуже близько до нього. Саме те, що ми хочемо від кількісної ПЛР у реальному часі.

Ефективність значень реакції від 90 до 110% вважаються прийнятними для реакцій КПЦР.

Кінцева концентрація кожного праймера в реакції ПЛР має становити від 0,05 до 1 мкМ. Отже, якщо ви візьмете по 1 мкл кожного з прямого та зворотного праймерів у загальному реакційному об’ємі 20 мкл, це становитиме кінцеву концентрацію 0,5 мкМ.

Якщо ви бачите ефективність понад 100%, спробуйте більше розбавити свої зразки або не включати більш високі розведення в розрахунки ефективності. Для значень нижче 90%, ви можете мати забруднення інгібіторами або низьку ефективність грунтовки.